Analýza Toxoplasma gondii (PCR), č. AN321ВПТ pro domácí mazlíčky, kočky a psy v Moskvě

Toxoplasma je rod parazitických protistů třídy Sporozoa, řádu Coccidia, včetně jednoho druhu – Toxoplasma gondii. Tato kokcidie je nejčastějším intracelulárním parazitem teplokrevných živočichů. Konečnými hostiteli parazita jsou kočky, v jejichž tělech je ukončena sexuální fáze vývoje Toxoplasma (enteroepiteliální cyklus), po které se ve výkalech uvolňují oocysty, které jsou odolné vůči faktorům prostředí. Po kontaktu s kyslíkem při určité teplotě a vlhkosti dochází uvnitř oocyst k vývoji po dobu 1-5 dnů, tento proces se nazývá sporulace. Po požití se z oocyst vynoří sporozoity. Sporozoiti dávají vzniknout tachyzoitům, které pronikají do krve a lymfy stěnou trávicího traktu koček a mezihostitelů.

1. Příprava pacienta
2. Indikace a kontraindikace
3. Interpretace a forma výstupu výsledku

T. gondii může vstoupit do většiny savčích buněk a podstoupit asexuální reprodukci, dokud není buňka zničena. Za přítomnosti imunitní odpovědi se replikace tachyzoitů zastaví a vyvinou se pomalu se dělící bradyzoity, které přetrvávají v cystách ve tkáních mimo střevo.

Tachyzoiti a bradyzoiti mají kromě běžných antigenů různé antigeny: bradyzoiti mají antigeny SAG4(p18) a BSR4(p36) a tachyzoité mají SAG1, SAG2.

Tkáňové cysty se mohou tvořit v centrálním nervovém systému, svalech a vnitřních orgánech. Perzistence bradyzoitů v tkáňových cystách po celý život hostitelského zvířete je možná. Séroprevalence T. gondii se liší v závislosti na životním stylu a věku zvířete. Psi nevylučují oocysty T. gondii, ale mohou mechanicky přenášet cysty, když se dostanou do kontaktu s kontaminovanými kočičími výkaly. U psů je klinická forma onemocnění způsobena tkáňovou fází infekce T. gondii.

K infekci teplokrevných živočichů dochází po požití jednoho ze tří stádií T. gondii (sporozoiti, tachyzoiti, bradyzoiti), může dojít i k transplacentárnímu přenosu. Po požití tachyzoitů se přeměňují na merozoity, kteří se množí v epiteliálních buňkách gastrointestinálního traktu, načež se přeměňují na mikro- a makrogamety. Když mikrogamety proniknou do makrogamet, vytvoří se zygoty a následně se vytvoří nesporulované oocysty, které jsou během 3-20 dnů vylučovány stolicí. Po sporulaci (tvorba sporozoitů v oocystě) mohou oocysty přežívat ve vnějším prostředí několik měsíců až let a jsou odolné vůči většině dezinfekčních prostředků. Vývoj klinické formy toxoplazmózy je dán charakteristikou interakcí „parazit-hostitel“, kmenem toxoplazmózy a přítomností imunosuprese.

U psů je infekce dýchacích, gastrointestinálních a nervosvalových tkání doprovázena horečkou, zvracením, průjmem, respirační depresí, ataxií, křečemi a při generalizované infekci je obvykle pozorován ikterus. Generalizovaná toxoplazmóza se nejčastěji vyskytuje u psů, kteří jsou imunosuprimovaní, jako je psinka, nebo léčeni cyklosporiny, aby se zabránilo odmítnutí transplantátu. Neurologické symptomy jsou zaznamenány, když je infekce lokalizována a zahrnují ataxii, záchvaty, třes, neurologické deficity hlavových nervů, parézu a paralýzu. Při myositidě způsobené toxoplazmózou mají psi slabost, napjatou chůzi nebo svalovou atrofii. Je také možná rychlá progrese tetraparézy a dysfunkce dolních motorických neuronů. U některých psů je postižen myokard, což je doprovázeno ventrikulárními arytmiemi, retinitidou, přední uveitidou, iridocyklitidou a zánětem zrakového nervu, dále kožní léze doprovázené svěděním, tvorbou pustul, podkožních uzlů a/nebo alopecií.

Diagnostika toxoplazmózy vyžaduje správnou interpretaci výsledků klinických, cytologických, parazitologických, sérologických studií a studií PCR.

Stávající PCR testovací systémy dokážou detekovat DNA T. gondii ve výkalech nemocných koček a odlišit toxoplasmu od jiných patogenů. DNA T. gondii lze detekovat i ve vzorcích krve zdravých psů a koček, proto se PCR obvykle používá ve spojení s cytologickým, histopatologickým nebo sérologickým vyšetřením. Nejpřesnější diagnózu toxoplazmózy, doprovázené poškozením centrálního nervového systému (CNS), lze stanovit, když jsou v séru, plné krvi, výpotku nebo mozkomíšním moku (CSF) detekovány specifické protilátky proti T. gondii a jsou získány pozitivní výsledky z testování těchto vzorků pomocí PCR.

Testovaný analyt: ascitický, hrudní, perikardiální.

Metoda výzkumu: PCR v reálném čase.

Příprava pacienta: laparocentéza a torakocentéza jsou minimálně invazivní výkony, které se snadno provádějí; představuje minimální riziko a nepohodlí pro zvíře. Zákrok se obvykle provádí bez anestezie; Sedace může být vyžadována, pokud je zvíře neklidné (zejména kočky) nebo má bolesti. Před provedením výkonu perikardiocentézy je nutné informovat majitele zvířete o možných rizicích a komplikacích výkonu, jejichž pravděpodobnost závisí nejen na zkušenostech odborníka, ale také na příčině perikardiálního výpotku (často neznámé v době řízení). Perikardiocentéza může také zhoršit krvácení z velkých a citlivých nádorů, což zase může zvýšit tamponádu nebo vyvolat zástavu srdce a dýchání.

indikace: hromadění tekutiny v dutině břišní, hrudní, perikardiální, potvrzené fyzikálním vyšetřením a diagnostickým zobrazením (rentgenové vyšetření, ultrazvuk dutiny hrudní a břišní, údaje z echokardiografie).

Kontraindikace: pro laparocentézu – dilatované střevní kličky; úplná střevní obstrukce; organomegalie; zvětšená děloha (těhotenství); Je třeba se vyhnout rychlé evakuaci velkých objemů tekutin, zejména bez předchozího příjmu sodíku.

U perikardiocentézy nedostatečný objem perikardiálního výpotku, kdy riziko perikardiocentézy převáží její potenciální přínos.

Relativní kontraindikace mohou zahrnovat: hemoragický perikardiální výpotek způsobený hemoragickými stavy nebo kapilární endokardiální krvácení, kdy pokles tlaku v perikardiální dutině může zvýšit krvácení. Perikardiocentéza není indikována, pokud se velikost perikardu zvětšuje se solidními nádory nebo pokud jsou v jeho dutině břišní orgány (s brániční kýlou).

Thoracentéza by se neměla provádět u zvířat s narušenou homeostázou.

Způsob výběru biomateriálu: laparocentéza, torakocentéza, perikardiocentéza.

Předanalýza:

1. provést punkci odpovídající tělesné dutiny;
2. přeneste výslednou kapalinu do zkumavky s šeříkovým víčkem (EDTA);
3. po přidání kapaliny opatrně 6-7krát zkumavku převraťte, aby se materiál promíchal s antikoagulantem;
4. zmrazit ve svislé poloze při -17°С…-23°С;
5. Označte zkumavku svým celým jménem. majitel a jméno zvířete, uveďte místo;
6. vyplňte doporučující formulář s uvedením kódu klienta;
7. bezpečnost vzorku při – 17 ℃…-23 ℃ 1 měsíc;
8. teplotní režim pro přepravu do laboratoře – 17 ℃…-23 ℃ (červené balení);

MINIMÁLNÍ OBJEM VÝFUKOVÉ KAPALINY PRO PROVÁDĚNÍ STUDIE JE 1 ML

Interpretace výsledku:

Výsledky studie obsahují informace pouze pro lékaře. Diagnóza se provádí na základě komplexního posouzení různých ukazatelů, dalších informací a závisí na diagnostických metodách.

Formulář výsledku: kvalitativní analýza.

Detekce nebo nedetekce DNA Toxoplasma gondii v testovaném vzorku.

1. Craig E. Greene, Infekční onemocnění psů a koček, čtvrté vydání S. Vaden, D. Knoll, F.
2. Smith, L. Tilley. Kompletní průvodce laboratorními a instrumentálními studiemi psů a koček.

Toxoplazmóza je rozšířené infekční onemocnění (antropozoonóza) způsobené intracelulárním parazitem Toxoplasma gondii, který může infikovat všechny druhy savců. Domácí mazlíčci mohou toto onemocnění přenést na člověka. Akutní toxoplazmóza je nebezpečná zejména pro těhotné ženy. V tomto článku se podrobně podíváme na to, co toxoplazmóza je, definujeme přesné diagnostické metody a jak ohrožuje domácí mazlíčky a lidi.

<b>Etiologie toxoplazmózy: cesty infekce a šíření</b>

Původcem kočičí toxoplazmózy je T. gondii, jednobuněčný prvokový mikroorganismus z kmene Apicomplexa. Parazit je v prostředí stabilní a je distribuován téměř všude. Jeho konečným hostitelem jsou zástupci čeledi koček, nejčastěji kočky domácí. Jako mezihostitelé mohou působit i další teplokrevní živočichové: ptáci, velký a malý skot, psi, krysy a dokonce i lidé, u kterých paraziti přetrvávají v tkáňových cystách v různých orgánech a tkáních po celý život hostitele (v nervovém, endokrinním a je postižen systém mononukleárních fagocytů, v důsledku čehož je narušen metabolismus, dochází k potratům a rodí se ošklivé, neživotaschopné plody)

K přenosu patogena dochází kontaktem s výkaly, konzumací potravy nebo vody kontaminované oocystami.

5 faktů o toxoplazmóze u lidí:

• ve většině případů onemocnění prochází v latentní formě a odeznívá bez specifické léčby;
• Můžete se nakazit pitím vody nebo jídla kontaminovaného výkaly infikovaného zvířete;
• Rizikovou skupinou jsou těhotné ženy zejména v 1. trimestru a novorozenci;
• patogen může proniknout transplacentárně, což vede k abnormalitám nebo potratu.

Vývoj toxoplazmózy u kočky a její příznaky

Patogen se do těla kočky dostává nejčastěji v důsledku pojídání myší, méně často ptáků, u kterých paraziti přetrvávají v tkáňových cystách v různých orgánech a tkáních. V žaludku zvířete se uvolňují cysty nebo tkáňové vakuoly, načež parazit proniká střevní stěnou. Zde dochází ke spojení mikro a makrogamet, což má za následek tvorbu oocyst. Ty jsou vylučovány stolicí do vnějšího prostředí.

Fáze toxoplazmózy u koček:

• subakutní – vyznačuje se řídkým průběhem (bez výrazných příznaků);
• akutní – doprovázené vyprazdňováním vakuol a tvorbou tachyzoitů (vyjadřují se obecné příznaky);
• chronické – patogeny se nacházejí v různých orgánech ve formě bradyzoitů.

Patogen žije uvnitř buněk a může se šířit pomocí makrofágů téměř do všech tkání, což ho činí nezranitelným pro imunitní systém.

Závažnost příznaků závisí na mnoha faktorech, ale častěji se onemocnění projevuje jako akutní respirační virová infekce nebo alimentární onemocnění. Mluvíme o výtoku z nosu, červených očích, slabosti, průjmu a hubnutí. V těžkých případech je postižen centrální nervový systém, dochází k uveitidě a dalším komplikacím.

<b>diagnostika</b>

Onemocnění lze určit na základě sérologických, PCR studií a dalších diagnostických metod. Metodou volby je ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Jako výzkumný materiál se používá sérum nebo krevní plazma.

Moderní vybavení a nejnovější techniky veterinární laboratoře „Chance Bio“ nám umožňují určit časná, akutní nebo chronická stádia toxoplazmózy. Pro zvířata a lidi jsou nejnebezpečnější raná a akutní stádia.

· Komplex kočičí toxoplazmózy (IgG + avidita) – analýza umožňuje určit stadium onemocnění, akutní nebo chronické. Analýza je diagnosticky důležitá během březosti koček, protože riziko poruch ve vývoji plodu je zvláště vysoké u časné infekce ve srovnání s chronickou infekcí.

· Toxoplazmóza (PCR) v reálném čase – detekce DNA Toxoplasma gondii pomocí polymerázové řetězové reakce.

Na toxoplazmózu se můžete nechat vyšetřit na kterékoli pobočce veterinární laboratoře Chance Bio nebo u našich partnerů.

Léčba a prevence

Toxpolasmóza u koček je obtížně léčitelná, protože patogen je izolován v ochranných vakuolách. K léčbě toxoplazmózy může váš veterinář předepsat antibiotika, inhibitory oocyst, protizánětlivé léky a léky pro symptomatickou léčbu.

Preventivně je nutné: provést dezinfekci v kočičím prostředí, jednou ročně provést diagnostiku ELISA nebo PCR. Tyto jednoduché metody vám umožní ochránit nejen vašeho mazlíčka, ale celou rodinu!